尊龙凯时提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养说明书如下，旨在为研究人员提供高效、可靠的细胞培养指导。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：第一次建议1:2传代，2天换液。

备注：悬浮细胞需离心收集，贴壁细胞按贴壁方法处理，使用无菌离心管收集培养基以作过渡培养。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放入超净台进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，可以进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况并拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后凭据，如果未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如未超过80%汇合度，收集培养液于离心管，留5ml完全培养基继续在37℃、5% CO2孵箱中培养；如超过80%，可进行传代培养。对于贴壁细胞，具体操作如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃下消化1-2分钟，观察细胞状态，迅速用5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其脱落，吸出悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1：2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

对于悬浮细胞，有两种传代方法可供选择：

1. 收集细胞，并在1000RPM下离心8-10分钟，弃上清液后补加1-2ml培养液后均匀混合。
2. 选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，按1:2比例分装到新的含8ml完全培养基的瓶中。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待细胞大部分回缩变圆后，加5ml完全培养基终止消化。
3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 冻存细胞需直接置于-80℃冰箱中，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中保存24小时后再转入。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种于T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养，第二天更换新鲜完全培养基。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能由于贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。后续再加入胰酶消化处理后，按前述步骤进行传代培养。

五、售后条款

针对细胞出现的问题，我们的重发政策包括：

1. 运输过程中造成的细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等，均可重发。
2. 收到细胞48小时内如发现污染问题，请提供真实的实验结果，核实后重发。
3. 细胞状态不佳（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发。
4. 细胞复苏后若发现问题，需提供支持文件以核实责任。

需要注意的是，由客户造成的细胞污染或不当操作等问题，恕不重发。

尊龙凯时致力于为客户提供优质的细胞培养服务，确保每一位研究人员能够顺利开展研究，获取可靠的实验结果。