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NEWS尊龙凯时的BiFC技术,让蛋白互作清晰可见!
来源:周冰环 日期:2025-03-20在生物医疗研究中,农杆菌注射技术被广泛应用于植物功能基因的研究。研究表明,通过这种方法可以有效注入目标基因,进而观察其在植物中的表现和相互作用。这对于探索植物的功能特性,以及开发新型农作物具有重要意义。
在探究DgnsLTP1和DgPIP在本氏烟草中的相互作用时,双分子荧光互补(BiFC)实验被用来揭示这两种蛋白之间的关系。值得注意的是,实验中使用了阴性对照,包括pCAMBIA1300-YFPn与pCAMBIA1300-YFPc、pCAMBIA1300-YFPn-DgnsLTP1与pCAMBIA1300-YFPc,以及pCAMBIA1300-YFPc-DgPIP,以确保结果的可信度。
在进行BiFC实验时,实验者应注意一些影响结果的因素。酵母双杂实验中,BD融合诱饵蛋白可能单独激活报告基因,导致假阳性结果。因此,调整实验条件以及优化目标蛋白的融合表达是必要的。此外,为了减少假阴性结果的产生,建议在BiFC实验之前进行亚细胞定位测试,以评估两个基因的表达效率。
在样品准备过程中,确保叶片表面的杂质被清理干净,可以排除可能的气泡。当观察显微镜下的样品时,激发光的电压应适中,这样才能清晰地观察到烟草细胞的轮廓和均匀分布。
荧光素酶互补实验与BiFC实验原理相似,前者是通过荧光素酶催化荧光素产生荧光信号进行验证,后者则依赖于荧光蛋白产生的荧光效果。然而,温度对荧光信号的互补性影响显著。为此,建议在室温或更低的温度下培养细菌或细胞,同时在生理条件下保持融合蛋白的正常表达,再进行低温处理或室温培养,以提高实验的可靠性。
在选择荧光标记蛋白时,通常使用GFP(绿色荧光蛋白)或RFP(红色荧光蛋白),而对于不同类型的蛋白质,可能需采用不同的荧光蛋白来实现最佳的检测效果。因此,对于研究中特定的蛋白,进行逐一分析显得尤为重要。
双荧光素酶实验在生物医疗研究领域发挥着重要作用,为解决多种生物学难题提供强有力的技术支持。尊龙凯时致力于提供包括双荧光素酶实验、荧光素酶蛋白互补实验(LCA)及双分子荧光互补(BIFC)等技术服务。我们从方案流程设计、技术执行到科研服务及成品试剂盒,全面满足您的需求。期待与您携手合作,共同推动生物医疗的进步。
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