尊龙凯时大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：建议第一次1:2传代，2天换液
备注：用无菌离心管收集培养基，以备对比研究。如果对比培养效果不理想，建议选用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，尽快培养至良好状态，并灌满完全培养液后密封瓶口，以确保细胞运输质量。用75%酒精对细胞瓶外表进行消毒，并在超净台上进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。显微镜下观察细胞生长状态，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片为售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。建议传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：
若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中；超过80%汇合度时进行传代，具体步骤如下：

1. 丢弃培养上清液，用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速回到操作台，轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中。

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，反转观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，收集沉淀并加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存管直接置于-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上后再进行转移。

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无冰晶，随后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能出现易脱落的现象，属正常情况。若脱落较多，可采取如下操作：将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清以作过渡培养，沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心、弃上清，添加1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况及判定标准：

1. 细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等问题，可重发。
2. 如遇细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存的细胞在复苏后24小时内存活不足情况需提供真实清晰的细胞状态照片，符合条件可重发。
4. 如在复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时内出现污染，符合条件可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 细胞收到当天及第2、3天需拍照，若3天未通知则视为产品合格。4-7天内出现问题需提供前三天照片与详细操作步骤，由技术人员判定是否重发。

1. 因客户原因导致的细胞污染，不予重发。
2. 因客户不当操作导致细胞状态不良，不予重发。
3. 使用非推荐的培养体系导致细胞状态不良，不予重发。
4. 未提供细胞培养前三天照片的情况，不予重发。
5. 细胞培养经过其它处理的，不予重发。
6. 收货后2天内未告知情况的不予重发。
7. 具体情况将根据实际情况判定。